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多巴胺試劑盒檢測步驟都有哪些?
   多巴胺試劑盒可用于人血漿和尿液中多巴胺的體外定量檢測,可手動操作,也可自動操作。進一步的研究表明:此試劑盒還可用于組織勻漿和細胞培養(yǎng)上清液的研究。
  多巴胺試劑盒檢測步驟
  1、在一次性試管內(nèi),用釋放緩沖液以1:51的比例稀釋提取的標準品,質(zhì)控品和尿液樣本(如:10ul提取樣本+500ul的釋放緩沖液)
  2、在包被板的每一微孔中加入75μL剛配置好的COMT酶溶液,輕輕振蕩。
  3、將預稀釋的標準品,質(zhì)控品和尿液樣本加100ul至相應孔內(nèi)血漿樣本直接加100ul于相應孔內(nèi)在此步驟中,將槍頭直接觸碰COMT酶溶液,顏色會轉(zhuǎn)為粉紅色,輕輕混勻。
  4、每孔中加入50μL多巴胺抗血清。
  5、蓋板。在振蕩器(400-600rpm)上18-25℃的環(huán)境下溫育120min
  6、棄去孔內(nèi)反應液,每孔用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。
  7、每孔加入100μL酶聯(lián)物
  8、蓋板。在軌道搖床(400-600rpm)上18-25℃的環(huán)境下溫育60min
  9、棄去孔內(nèi)反應液,用250-300μL已稀釋好的洗滌液洗板6次。
  10、加底物液和終止液時,其時間間隔應相同
  11、每孔加入200μL底物液
  12、在軌道搖床(400-600rpm)上18-25℃的環(huán)境下溫育40min。如果自動操作時的溫度超過25℃時,則應相應的將溫育時間縮短至30min。
  13、每孔加入50μL PNPP終止液以終止底物反應,輕輕振蕩包被板以充分混合試劑成分。
  14、加終止液后60min之內(nèi)405nm處讀取OD值。(參考波長:620-650nm)
  多巴胺試劑盒實驗標本采集必修課:
  1)標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
  2)血清:使用不含熱原的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
  3)血漿:3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
  4)細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  5)組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
  6)保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  多巴胺試劑盒不做任何有損顧客利益的事情,經(jīng)濟、實惠、可靠,完善、穩(wěn)定的實驗體系,優(yōu)秀的科研隊伍,先進的實驗設備、準確可靠的實驗結果,是您可靠的合作伙伴,*質(zhì)量有保證,帶給您Z滿意的實驗效果。
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