人胎球蛋白A檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
德國(guó)DRG*，貨號(hào)：EIA4522
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預(yù)期用途
此試劑盒可用于血清，血漿，細(xì)胞上清，組織提取物和尿液中人胎球蛋白A也稱之為α-2-HS糖蛋白的定量的檢測(cè)；血清或血漿中胎球蛋白A的檢測(cè)可作為某些癌癥及基因遺傳缺陷的血清蛋白診斷的輔助工具；此試劑盒僅供實(shí)驗(yàn)室專業(yè)人士使用
簡(jiǎn)介
胎球蛋白A也稱之為α-2-HS糖蛋白，是由兩個(gè)氨基末端抑制域和一個(gè)較小的羧基末端域組成的59 kDa 分子量的糖蛋白；由肝臟合成，分泌至血流，成年哺乳動(dòng)物體內(nèi)的濃度范圍在0.5-1.0g/L；嬰兒期的血清胎球蛋白A含量高，參與蛋白酶抑制活性，與鈣代謝和骨生成調(diào)節(jié)相關(guān)；累積于骨和牙齒內(nèi)，作為生物學(xué)上非膠原骨蛋白的主要部分，研究表明，胎球蛋白A是循環(huán)中主要的鈣化抑制劑；干涉鈣鹽沉淀；近期研究顯示低水平胎球蛋白A的慢性腎臟衰竭患者與心血管病的高死亡率顯著相關(guān)；另一方面，糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高，這是獨(dú)立于胰島素抑制劑的其他標(biāo)記物；另外，高胎球蛋白A水平還可作為心血管疾病的的危險(xiǎn)標(biāo)記物
實(shí)驗(yàn)原理
此試劑盒可用于血清樣本中人胎球蛋白A的定量檢測(cè)；采用雙位點(diǎn)夾心法，羊抗人胎球蛋白A多抗結(jié)合人胎球蛋白A的不同位點(diǎn)
將含人胎球蛋白A的試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和預(yù)稀釋樣本加至包被了高度親和羊抗人胎球蛋白A多抗的微孔內(nèi)，*次孵育，包被抗體捕獲樣本中的人胎球蛋白A，未結(jié)合的蛋白洗板除去，然后加入HRP標(biāo)記的抗人胎球蛋白A酶聯(lián)物加入至每孔，“夾心-人胎球蛋白A-HRP-標(biāo)記的酶聯(lián)物”形成夾心，未結(jié)合的示蹤抗體通過(guò)洗板除去，結(jié)合于包被板上的HRP酶免物與底物液定時(shí)反應(yīng)，然后在酶標(biāo)儀上檢測(cè)；結(jié)合于包被胎球蛋白A上示蹤抗體酶活性與樣本中胎球蛋白A的含量直接相關(guān)，在點(diǎn)對(duì)點(diǎn)或三次回歸模式下以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度比上OD值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣本中的胎球蛋白A可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到
試劑：準(zhǔn)備與貯存
此試劑盒收到后立即貯存于2-8℃下，效期見(jiàn)試劑盒標(biāo)簽；所有成分在2-8℃下可保存至有效期
使用前，所有試劑平衡至室溫，不同批次的試劑不能交換使用
安全注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供
樣本采集
人胎球蛋白A的檢測(cè)所需血清或血漿樣本量?jī)H10 ul
個(gè)人在采樣前無(wú)需特殊準(zhǔn)備，全血采集，室溫下立即凝集30min，然后離心分離出血清（850-1500 xg 10min）。全血采集3小時(shí)內(nèi)需將血清從凝集中分離出來(lái)，轉(zhuǎn)移至另一干凈試管；血清樣本可保存在-20℃或更低，避免超過(guò)三次的凍融
建議采用24小時(shí)尿液來(lái)檢測(cè)尿液中的胎球蛋白A；采集第二天早晨的尿液，排除采樣前剛進(jìn)行劇烈運(yùn)動(dòng)的，因腎功能不全導(dǎo)致多尿的；由利尿藥引起的人體內(nèi)尿蛋白含量波動(dòng)降低，可能與尿肌酸酐濃度相關(guān)；
細(xì)胞上清，組織提取物則需進(jìn)行試驗(yàn)樣本的倍比稀釋；多個(gè)平行樣檢測(cè)得到更的試驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)步驟
患者樣本的準(zhǔn)備
患者血清或血漿樣本在檢測(cè)前需用試驗(yàn)緩沖液進(jìn)行1:10000 的稀釋
注意：建議采用/經(jīng)校準(zhǔn)的移液器，稀釋過(guò)程小心操作，得到更的結(jié)果；建議采用多通道（Combitip）12.5ml的Eppendorf可重復(fù)移液器加1ml的試驗(yàn)緩沖液，而不用50ml的槍頭
患者尿液樣本的實(shí)驗(yàn)前用試驗(yàn)緩沖液1:100的稀釋
注意：若所得結(jié)果中樣本濃度高于5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品中的zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度，則尿液樣本需進(jìn)一步稀釋（如1:500），然后重新檢測(cè)
試劑準(zhǔn)備
試驗(yàn)操作
| ROW | STRIP 1 | STRIP 2 | STRIP 3 |
| A | STD 1 | STD 5 | SAMPLE 2 |
| B | STD 1 | STD 5 | SAMPLE 2 |
| C | STD 2 | C 1 | SAMPLE 3 |
| D | STD 2 | C 1 | SAMPLE 3 |
| E | STD 3 | C 2 | |
| F | STD 3 | C 2 | |
| G | STD 4 | SAMPLE 1 | |
| H | STD 4 | SAMPLE 1 |
注意：為降低背景色，可以雙波長(zhǎng)檢測(cè)，設(shè)置參考波長(zhǎng)：595nm 或620 nm 或630nm
操作注意事項(xiàng)
結(jié)果說(shuō)明
質(zhì)控品和樣本濃度（1:10000）可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，若采用的是對(duì)數(shù)-對(duì)數(shù)或數(shù)據(jù)處理軟件計(jì)算則需用到對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換；樣本校正吸收值在濃度1ng/ml 和下一個(gè)zui高標(biāo)準(zhǔn)品間的需通過(guò)公式計(jì)算：
| 未知樣本濃度= | 未知樣本吸收值 | x 2nd 標(biāo)準(zhǔn)品濃度值 |
| 2nd 標(biāo)準(zhǔn)品吸光值 |
質(zhì)量控制
適當(dāng)?shù)囊阎デ虻鞍譇水平的質(zhì)控可確保試驗(yàn)結(jié)果的有效性；建議所有實(shí)驗(yàn)室除了試劑盒本身的質(zhì)控外，還應(yīng)額外建立自己實(shí)驗(yàn)室的胎球蛋白A質(zhì)控
性能指標(biāo)
人胎球蛋白A分析靈敏度，零標(biāo)準(zhǔn)品20次重復(fù)試驗(yàn)，95%置信區(qū)間，zui后得5.0 ng/ml
兩個(gè)人的血清樣本進(jìn)行稀釋檢測(cè)，結(jié)果如下，ng/ml
| # | 稀釋比例 | 檢測(cè)值 | 期望值 | 回收率% |
| 1 | 1:10,000 | 21.9 | ||
| 1:20,000 | 11.9 | 11.0 | 108 | |
| 1:40,000 | 5.3 | 5.5 | 96 | |
| 1:80,000 | 2.9 | 2.7 | 107 | |
| 1:160,000 | 1.6 | 1.4 | 114 | |
| 2 | 1:10,000 | 192 | ||
| 1:20,000 | 99.9 | 96 | 104 | |
| 1:40,000 | 45.2 | 48 | 94 | |
| 1:80,000 | 22.2 | 24 | 93 | |
| 1:160,000 | 13.4 | 12 | 112 |
兩個(gè)樣本在一個(gè)試驗(yàn)中做20次重復(fù)檢測(cè)，分析板內(nèi)差異
| 胎球蛋白A均值（ng/mL） | CV （%） |
| 33.6 | 5.5 |
| 121.1 | 4.8 |
| 胎球蛋白A均值（ng/mL） | CV （%） |
| 32.4 | 6.8 |
| 123.7 | 5.7 |
| # | 原始值 | 加入的量 | 檢測(cè)值 | 期望值 | 回收率% |
| 1 | 33.6 | 21 | 25.1 | 27.3 | 92 |
| 63 | 44.4 | 48.3 | 92 | ||
| 200 | 120.1 | 116.8 | 103 | ||
| 2 | 121.1 | 21 | 68.9 | 71.1 | 97 |
| 63 | 88.6 | 92.1 | 96 | ||
| 200 | 157.1 | 160.6 | 98 |
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