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醛固酮ELISA試劑盒

醛固酮ELISA試劑盒

德國IBL*，貨號：DB52001

德國IBL中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務

1、應用范圍

此ELISA試劑盒可用于人血清和尿液中醛固酮的定量檢測。注：僅供體外診斷用。

2、實驗原理

此ELISA試劑盒采用的是典型的競爭法。標準品、質(zhì)控品和病人樣品中的未標記抗原和酶標抗原競爭結(jié)合包被板上有限的抗體結(jié)合位點。洗板以除去未結(jié)合的物質(zhì)。洗板后，加入酶底物液。zui后加入終止液以終止酶反應，并在酶標儀上讀取OD值。包被孔中溶液所顯示的顏色與樣品中醛固酮的量成正比。實驗中所用的標準品可作一條標準曲線，我們可以直接從標準曲線上讀取樣品和質(zhì)控品中醛固酮的量。

3、臨床應用

醛固酮是一種有效的鹽皮質(zhì)激素，這種鹽皮質(zhì)激素的合成和分泌都會受到體內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)的調(diào)控。醛固酮可促進腎遠曲小管對鈉的重吸收，從而可以保鈉排鉀，進而控制循環(huán)血溶量。醛固酮長期分泌過多會引起高血壓。血清醛固酮的檢測加上血漿腎素水平的檢測通常都用來區(qū)分原發(fā)性和續(xù)發(fā)性醛固酮增多癥。

分類	血清醛固酮	血漿腎素
原發(fā)性醛固酮增多癥	低	高
續(xù)發(fā)性醛固酮增多癥	高	高

醛固酮的檢測再加上選擇性抑制和刺激實驗，我們可以將原發(fā)性醛固酮增多癥分為兩種基本類型：

1）由腎上腺瘤（一個或兩個）引起的原發(fā)性醛固酮增多癥。

2）由腎上腺增生引起的原發(fā)性醛固酮增多癥。

這種分類對于疾病的治療與處理具有重要作用。腎上腺瘤一般對外科手反應良好，而腎上腺增生在醫(yī)學上更好處理?？偟谜f來，用ELISA方法檢測血清醛固酮是高血壓鑒別診斷的一個重要輔助工具。

4、樣品的采集與儲存

血清：進行一次雙份檢測大概需要0.2ml血清。采集4-5ml血液到相應的標記試管中，并待其凝血，離心獲取血清。4℃下可穩(wěn)定存放24個小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存-10℃的環(huán)境或更低溫度下。

尿液：進行一次雙份檢測大概需要0.2ml尿液。將24小時尿液收集到相應的樣品容器中。4℃理可穩(wěn)定存放24小時，如果實驗過幾天再做，可將樣品凍存于-10℃或更低溫度的環(huán)境下。將所有的人樣品都當作潛在的生物有害物質(zhì)，處理時應當特別小心。

5、樣品預處理

血清：此檢測系統(tǒng)是一直接檢測系統(tǒng)，不需要進行任何樣品預處理。

尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例稀釋尿液樣品。例如：用1ml尿液稀釋液稀釋20μl尿液樣品。

6、實驗所需器材但試劑盒不提供

1）移液器，50；100；150和300μl

2）取樣吸頭

3）蒸餾水或去離子水

4）搖床

5）酶標儀

6）尿液稀釋液（如果用尿液樣品做實驗，就得稀釋樣品），用于尿液樣品的稀釋。

7、試劑盒成份

1）兔抗醛固酮抗體包被的可拆包被板，即用。內(nèi)含：抗醛固酮抗體包被的96孔包被板，密封于含干燥劑的包半裝袋中，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標簽上的有效期。

2）HRP標記的醛固酮酶聯(lián)物，50倍濃縮型，內(nèi)含：HRP標記的醛固酮酶聯(lián)物、蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：300μl/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標簽上的有效期，制備：使用前用檢測緩沖液按1：50的比例進行稀釋（例如：40μl HRP酶聯(lián)物中加入2ml檢測緩沖液。如果整個包被板都使用，可以用12ml檢測緩沖液稀釋240μl HRP酶聯(lián)物，棄去剩余試劑。

3）醛固酮標準品，即用。6支，內(nèi)含：醛固酮、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用血清和一定量的醛固酮制備而成。下表為標準品的大概濃度，具體濃度請見試劑瓶標簽：

標準品	濃度	體積/支
標準品 A	0 pg/ml	2.0 ml
標準品 B	15 pg/ml	0.6 ml
標準品 C	50 pg/ml	0.6 ml
標準品 D	200 pg/ml	0.6 ml
標準品 E	500 pg/ml	0.6 ml
標準品 F	1000 pg/ml	0.6 ml

儲存于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標簽上有效期，一旦打開，所有的標準品都必須在14天內(nèi)用完或?qū)⑵鋬龃妫苊夥磸蛢鋈凇?/div>

4）質(zhì)控品，即用，1支，內(nèi)含：醛固酮、人血清白蛋白和無汞防腐劑，用緩沖液和一定量的醛固酮制備而成，具體濃度及可接受范圍請見試劑瓶標簽。體積：0.6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標簽上的有效期，一旦打開，所有的質(zhì)控品都必須在14天內(nèi)用完，必免反復凍融。

5）濃縮冼滌液，10倍濃縮型，1支，內(nèi)含：緩沖液、非離子型去垢劑和無汞防腐劑，體積：50ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，有效期：12個月或標簽上的有效期，制備：使用前用蒸餾水或去離子水按1：10的比例進行稀釋，如果整個包被板都使用，可用450ml蒸餾水稀釋50ml濃縮冼滌液。

6）檢測緩沖液，即用，1支，內(nèi)含：蛋白緩沖液和無汞防腐劑，體積：15ml/支，穩(wěn)定性：12個月或標簽上的有效期。

7）TMB底物液，即用，1支，內(nèi)含：TMB、過氧化氫和非DMF或DMSO，體積：16ml/支，儲存：冷藏于2-8℃的環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標簽上的有效期。

8）終止液，即用，1支，內(nèi)含：1M的硫酸，體積：6ml/支，儲存：冷藏于2-8℃環(huán)境下，穩(wěn)定性：12個月或標簽上的有效期。

8、實驗步驟

樣品預處理：

血清：無

尿液：使用前用尿液稀釋液按1：50的比例進行稀釋。

使用前必須將所有的試劑都平衡到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品都必須作雙份檢測，一旦實驗開，所有的步驟都必須完整的進行下去。

1）制備好即用型的HRP酶聯(lián)物和檢測緩沖液。如果用尿液作實驗，應將尿液稀釋好。

2）取出所需數(shù)目的板條，將不用的板條重新密封于包裝袋中并冷藏。

3）將標準品、質(zhì)控品和樣品（血清或已稀釋好的尿液）分別50μl加入到相應的微孔中（雙份檢測）

4）在每一微孔中加入100μl酶聯(lián)物（建議您使用多道移液器）。