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森林腦炎IgG ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
森林腦炎 IgG ELISA 檢測(cè)試劑盒
(德國(guó)IBL進(jìn)口原裝:RE57401)
德國(guó)IBL中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)
 
【預(yù)期用途】
本試劑盒可用于定量檢測(cè)人血清血漿和腦脊髓液中的抗腦炎病毒(TEBV)的IgG抗體,從而控制體液免疫狀態(tài)和確定疫苗接種后的血清轉(zhuǎn)化。鑒別明顯的和潛在的腦炎病毒的感染,通常附帶著抗腦炎病毒的IgM的檢測(cè)。
【臨床背景】
在歐洲,森林腦炎和萊姆病是zui為常見(jiàn)的蜱媒傳染病。萊姆病分布非常廣泛,但森林腦炎只存在于一些特殊的地方(德國(guó)南部、圖林根州、奧地利、瑞士、匈牙利、瑞典、捷克、斯洛伐克共和國(guó)、克羅地亞、斯洛文尼亞以及一些前蘇聯(lián)地區(qū)等。)。
這兩種病的感染都跟它們的發(fā)育類(lèi)似,包含兩個(gè)或兩個(gè)以上的階段。森林腦炎的病毒血癥階段含有3~14天的孵育階段,在此階段的初期(1-8天) 會(huì)出現(xiàn)類(lèi)似流行性感冒的癥狀。在大概一周沒(méi)發(fā)熱的間隔后,感染進(jìn)入第二階段,以神經(jīng)系統(tǒng)方面的癥狀強(qiáng)度的改變?yōu)樘卣鳎@種階段可能持續(xù)幾周時(shí)間。
在疾病第二階段的初期,通常可以檢測(cè)到抗森林腦炎的IgM抗體??贵w水平在2~6周后達(dá)到峰值??贵w水平要降低到可檢測(cè)以下可能需要10個(gè)月時(shí) 間??股帜X炎的IgG抗體在IgM抗體出現(xiàn)的同時(shí)或者之后幾天內(nèi)即可檢測(cè)到。感染意味著出現(xiàn)通常能維持一生的免疫力。接種疫苗也能預(yù)防疾病。
腦脊髓液中的森林腦炎特異性抗體可能是在對(duì)森林腦炎抗原進(jìn)行免疫應(yīng)答時(shí)或者之前由血腦屏障的功能紊亂引起的,又或者是局部的免疫應(yīng)答引起的。所以,腦脊髓液中抗體水平的波動(dòng)可能跟這些一般在血清或血漿中的抗體水平不一樣。
由于添加了RF/IgG吸附劑所以RF因子和特異性IgG不會(huì)干涉IgM的檢測(cè)。這兩種檢測(cè)系統(tǒng)的結(jié)合可以用于森林腦炎疫苗接種后的體液免疫隨訪或者感染,早期的森林腦炎感染和監(jiān)測(cè)人血清、血漿和腦脊髓液中的抗體水平。
【檢測(cè)原理】
本試劑盒使用的是兩步法ELISA。微孔中包被了失活的森林腦炎病毒。稀釋后的血清、血漿或者腦脊髓液樣本在微孔中孵育。孵育期間,森林腦炎特 異性抗體會(huì)跟森林腦炎病毒相集合,未結(jié)合的部分通過(guò)洗板洗去。加入酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體會(huì)跟人IgG抗體特異性結(jié)合。加入底物液后 顏色轉(zhuǎn)變成藍(lán)色,孵育一段時(shí)間后加入終止液終止反應(yīng),顏色從藍(lán)色轉(zhuǎn)換成黃色,zui后在酶標(biāo)儀上讀數(shù)。
【儲(chǔ)存和穩(wěn)定性】
此試劑盒在室溫發(fā)貨,儲(chǔ)存在2 – 8℃。避免高溫或太陽(yáng)光直射。樣本和準(zhǔn)備好的試劑的儲(chǔ)存和穩(wěn)定性在相應(yīng)的章節(jié)都有闡明。包被板條在有效期內(nèi)都能保持穩(wěn)定,儲(chǔ)存在2 – 8℃下時(shí)應(yīng)和干燥劑一起密封在小袋中。
【樣本采集和儲(chǔ)存】
血清、血漿或者腦脊髓液
遵守靜脈穿刺的一般規(guī)定,從收集到實(shí)驗(yàn)期間,保存樣本化學(xué)性質(zhì)的完整是非常重要的,注意不要使用溶血的、脂血、黃疸的樣本,樣本出現(xiàn)渾濁應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)前離心并去除所有的微粒物質(zhì)。
儲(chǔ)存
2~8℃
≤-20℃(小瓶分裝)
避免高溫和陽(yáng)光直射,避免反復(fù)凍融
穩(wěn)定性
5d
12個(gè)月
【試劑組成】
數(shù)量
標(biāo)識(shí)
組分
1×12×8
MTP
包被板
即用,可拆分,包被了已滅活的TBE病毒
2×75mL
DILBUF
稀釋緩沖液
即用,紅色
1×0.6mL
ENZCONJ CONC
酶聯(lián)物
藍(lán)色,酶標(biāo)記的抗人IgG抗體
5×0.35mL
CAL 1-5
濃縮校準(zhǔn)品
含人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑
2×0.35mL
Control LL
Control HL
質(zhì)控LL+HL 濃縮
陽(yáng)性質(zhì)控血清,LL“低水平”HL“高水平”
含:人血清,穩(wěn)定劑,防腐劑。
濃縮的倍數(shù)以不同的批號(hào)而不同,具體請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽
1×100mL
WASHBUF
CONC
洗滌液,10倍濃縮
含磷酸鹽緩沖液
2×12mL
TMB SUBS
TMB底物液
即用,含TMB
1×12mL
TMB STOP
TMB終止液
即用,含0.5M 硫酸
FOIL
封板片
注:洗滌液,底物液,終止液可以跟以下產(chǎn)品中的交換使用:白喉(RE57431)森林腦炎IgM(RE57411)破傷風(fēng)(RE57441)
【試驗(yàn)需要但試劑盒不提供的設(shè)備】
1.         一次性使用的5;25;50;100;500μl加樣槍頭
2.         漩渦混勻器
3.         樣品稀釋管
4.         軌道振蕩器(200-900rpm)
5.         8道微量移液器和加樣槽。
6.         洗瓶,自動(dòng)化或半自動(dòng)化的洗板機(jī)
7.         450nm的酶標(biāo)儀
8.         雙蒸水或去離子水
9.         紙巾,移液管,計(jì)時(shí)器
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
1.       濃縮試劑的準(zhǔn)備(用于32孔的例子)
稀釋/溶解
組分
加入稀釋液的量
稀釋液
比例
附注
儲(chǔ)存
穩(wěn)定性
80μL
ENZCONJ CONC
8mL
DILBUF
1:101
仔細(xì)混勻
18-25℃
1小時(shí)
10mL
WASHBUF
CONC
90mL
蒸餾水
1:10
仔細(xì)混勻
2-8℃
2個(gè)月
 
 
 
 
2.       標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本的稀釋
 
稀釋方法
稀釋液
稀釋比例
備注
CAL 1-5
Control LL
Control HL
常規(guī)稀釋
DILBUF
1:101
例子:10μL 校準(zhǔn)品/質(zhì)控品+1000μL
血清、血漿
常規(guī)稀釋
DILBUF
1:101
例子:10μL樣本+1000μL
腦脊髓液
常規(guī)稀釋
DILBUF
1:9
例子:50μL樣本+400μL
用于標(biāo)準(zhǔn)曲線方法需要1~5校準(zhǔn)品和指控血清;樣本所含的濃度如果高于zui高校準(zhǔn)品濃度需要進(jìn)一步稀釋。用于一點(diǎn)標(biāo)定法則只需要校準(zhǔn)品4和質(zhì)控血清即可。
【實(shí)驗(yàn)步驟】
1.       將200μL已稀釋的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本加到相應(yīng)的微孔中。
2.       用封板片封板,室溫下(18-25℃)孵育1小時(shí)
3.       揭去封板片,棄去反應(yīng)液,用稀釋后的洗滌液洗板3次(250μL/孔/次),zui后通過(guò)拍板拍去殘留的液體
4.       將200μL已稀釋的酶聯(lián)物加到每個(gè)孔中
5.       用封板片封板,在室溫下(18-25℃)孵育1小時(shí)
6.       重復(fù)步驟3
7.       將200μL  TMB底物液加到每個(gè)孔中
8.       室溫(18-25℃)孵育30分鐘
9.       按加TMB底物液的順序,將50μL的終止液加到每個(gè)孔中,輕輕混勻
10.   在加入終止液后10分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀在450nm±10nm處讀數(shù)。
 
【結(jié)果的計(jì)算】
1.       標(biāo)準(zhǔn)曲線方法
在半對(duì)數(shù)紙上(或者使用自動(dòng)化儀器)以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸,相應(yīng)的濃度為X軸做出標(biāo)準(zhǔn)曲線,推薦使用4參數(shù)邏輯函數(shù)(Y=d+(a-b)/(1+(x/c)b))。
樣本的濃度應(yīng)當(dāng)直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀取,如果有稀釋?zhuān)瑒t在計(jì)算中應(yīng)該乘以稀釋倍數(shù),如果樣本的濃度過(guò)高,則需要按照實(shí)驗(yàn)前設(shè)置說(shuō)明稀釋樣本。
 
2.       一點(diǎn)標(biāo)定法
(1)       樣本濃度的手冊(cè)檢測(cè)
需要使用用校準(zhǔn)品4、質(zhì)控血清和樣本各自的平均OD值。校準(zhǔn)品4的OD必須要在的范圍內(nèi)(見(jiàn)一點(diǎn)標(biāo)定法評(píng)估表)。每次檢測(cè)都必須計(jì)算檢測(cè)特殊的校正因子。校準(zhǔn)品4的理論OD值都是按特定批次檢測(cè)得出的(見(jiàn)一點(diǎn)標(biāo)定法評(píng)估表)。將質(zhì)控血清和樣本的OD乘以校正因子:
質(zhì)控血清和樣本濃度可以從批次參考曲線中讀出。
例子:
校準(zhǔn)品4的理論OD值                  OD=1.377
校準(zhǔn)品4的檢測(cè)OD值                  OD=1.273
校正因子F                             F=1.082
樣本的檢測(cè)OD值                      OD=0.937
樣本的校正OD值                      OD=1.014
讀取濃度                         0.5VIEU/mL
(2)       腦脊髓液樣本濃度的計(jì)算(一點(diǎn)標(biāo)定法軟件)
打開(kāi)名為“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件,將QC證書(shū)的下列指標(biāo)填到Excel中:
校準(zhǔn)品4的理論OD值
校準(zhǔn)品4的OD范圍
臨界1和臨界2的理論OD值
臨界1 OD=灰區(qū)的zui低點(diǎn)
臨界2 OD=灰區(qū)的zui高點(diǎn)
填入檢測(cè)到的校準(zhǔn)品4平均OD,將腦脊髓液樣本的鑒別和OD插入到已準(zhǔn)備好的計(jì)算單中。腦脊髓液樣本的求值和OD都會(huì)自動(dòng)完成。
【結(jié)果的判定】
血清/血漿
<63VIEU/mL         陰性
63-126VIEU/mL       灰區(qū)
>126VIEU/mL        陽(yáng)性
腦脊髓液
OD<臨界1理論OD                      陰性
臨界1理論OD<OD<臨界2理論OD       灰區(qū)
OD>臨界2理論OD                      陽(yáng)性
【結(jié)果的說(shuō)明】
1.       疫苗
通過(guò)檢測(cè)血清血漿中的抗TBE的IgG抗體來(lái)證明血清轉(zhuǎn)化
(1)       抗TBE IgG陰性
接種疫苗后無(wú)血清轉(zhuǎn)化
(2)       抗TBE IgG 灰區(qū)
可能有血清轉(zhuǎn)化,建議在2~4周內(nèi)再次檢測(cè)
(3)       抗TBE IgG陽(yáng)性
接種疫苗后有血清轉(zhuǎn)化
2.       感染
(1)       抗TBE IgM和抗TBE IgG 陰性    
無(wú)感染
(2)       抗TBE IgM陰性和TBE IgG 陽(yáng)性  
這可能是潛在的免疫或者是幾周或幾月之前的感染
(3)       抗TBE IgM陽(yáng)性和TBE IgG陰性
可能有新近感染
(4)       抗TBE IgM和抗TBE IgG都陽(yáng)性
有感染
本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。
 
 
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