2） 在檢測開始之前，仔細(xì)和完整的閱讀說明書，使用試劑盒提供的包裝插件的有效版本， 確保所有的程序都清楚。尋求更多信息（比如：臨床背景，檢測操作，自動化操作說明，可選擇的軟件，文獻(xiàn)等等），請查看IBL公司主頁。
| 注意 | 人體內(nèi)的兒茶酚氨和間甲腎上腺素的釋放會受到一些食品和藥物的影響。因此在樣品采集前72小時(shí)內(nèi)病人應(yīng)禁止服用下列食物和藥品：維生素B，咖啡，香蕉，α甲基多巴，MAO，COMT抑制劑，還有降血壓類藥物。 |
| 可以是自然尿液也可使用24h尿液。將病人24h內(nèi)的所有尿液都收集到，并混合于含10-15ml 6N的HCl防腐劑的試劑瓶中。 | ||
| 貯存 | ≤-20℃ | 避免熱源或太陽直射，避免反復(fù)凍融，冷凍狀態(tài)下運(yùn)輸樣品。 |
| 穩(wěn)定性 | 6個(gè)月 | |
| 注意 | 試劑盒有足夠做96份單孔檢測或48份雙孔檢測或間甲腎上腺素和去甲變腎上腺素共同檢測時(shí)所需的試劑成分 |
| 數(shù)量 | 標(biāo)記 | 成分 |
| 1×50mL | ASSAYBUF CONC | 檢測緩沖液，10倍濃縮，內(nèi)含磷酸緩沖液，BSA（牛血清白蛋白），1%的NaN3 |
| 1×2.25mL | ACYLREAG | 酰化試劑，即用，內(nèi)含二甲基甲酰胺 |
| 1×10mL | INDICATIORBUF | 指示劑緩沖液，紫色，即用，內(nèi)含Tris緩沖液和苯酚紅（pH小于7.5時(shí)顏色會發(fā)生變化）。 |
| 2×50× | HYDRTUB | 水解試管，可處理的聚苯乙烯試管 |
| 1×20mL | HCl | HCl，即用，內(nèi)含0.1M HCl |
| 1×12×8 | MTP | 包被板，可拆分，包被有抗兔IgG（羊，多克?。?/span> |
| 1×7×0.35mL | CAL A-G | 標(biāo)準(zhǔn)品，A-G含去甲變腎上腺素和0.1M的HCl 0; 77; 192; 480; 1200; 3000; 7500μmol/L 0; 0.42; 1.05; 2.63; 6.56; 16.4; 41.0μmol/L |
| 1×2×0.5mL | CONTROL 1+2 | 質(zhì)控1+2，即用，濃度及允許范圍請見標(biāo)簽 |
| 3× | BIOTIN LYO | 去甲變腎上腺素生物素（凍干品），內(nèi)含去變甲狀腺生物素, Tris緩沖液,<0.1%NaN3（可再生） |
| 1×7m L | ANTISERUM | 去甲變腎上腺素抗血清，內(nèi)含含抗血清（兔）,磷酸緩沖液,0.1%NaN3 |
| 1×250μl | ENZCONJ CONC | 酶聯(lián)物（100×），含抗生物素抗體,并聯(lián)結(jié)到堿性磷酸酶上,Tris緩沖液,0.01%NaN3 |
| 9× | PNPP SUBS | PNPP底物片，含PNPP |
| 1×27mL | PNPP BUF | PNPP底物緩沖液，含二乙醇胺、水和0.05%NaN3 |
| 1×15mL | PNPP STOP | PNPP終止液，即用，內(nèi)含1M的NaOH和0.25M的EDTA。 |
| 1×50mL | WASHBUF CONC | 洗滌液（10×），含Tris緩沖液,HCL,吐溫,0.2%NaN3 |
| 3× | FOIL | 粘性金屬板 |
8、注意事項(xiàng)
7） 包被板的清洗很重要，清洗不合理將會導(dǎo)致錯誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議使用多孔移液器或自動包被板清洗系統(tǒng)進(jìn)行清洗。溫育期間避免微孔干燥，清洗和吸液時(shí)不要碰到包被板微孔。清洗時(shí)，確保所有的微孔都充滿蒸餾水，并且無殘留物。
8） 濕度會對包被孔產(chǎn)生影響，所以包被板未平衡到室溫時(shí)不要打開包裝。不使用的微孔應(yīng)立即裝入含干燥劑的包裝袋中。
9、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明
| 注意 | 這種96人份的試劑盒可分成3份獨(dú)立進(jìn)行，以下體積為4條（32人份）一次檢測所需體積。如果想把標(biāo)準(zhǔn)品從7份減到6份，可以把標(biāo)準(zhǔn)品G棄取。而允許范圍相應(yīng)的減少到3000μg/l。 |
| 特別注意 | 如果你使用甲狀腺ELISA試劑盒來同時(shí)檢測間甲腎上腺素和去甲變腎上腺素，請勿混合間甲腎上腺素和去甲變腎上腺素酶聯(lián)物。 | ||||||
| 稀釋/溶解 | 成分 | | 稀釋 | 比例 | 備注 | 貯存 | 穩(wěn)定性 |
| 15mL | 檢測用緩沖液 | 150mL | 雙蒸水 | 1:10 | | 2-8°C | 2周 |
| 15mL | 洗滌液 | 150mL | 雙蒸水 | 1:10 | | 2-8°C | 4周 |
| 1瓶 | 去甲變腎上腺素生物素 | 2mL | 稀釋的檢測緩沖液 | | 臨時(shí)配制,僅使用一次,靜置5min,混合時(shí)避免氣泡. | ≤-20°C | 2個(gè)月 |
| 60μl | 酶聯(lián)物 | 6mL | 稀釋的檢測緩沖液 | 1:101 | 臨時(shí)配制,僅使用一次 | 18-25°C | 5小時(shí) |
| 3 | PNPP底物片 | 8mL | PNPP底物緩沖液 | | 臨時(shí)配制,僅使用一次 | 18-25°C | 5小時(shí) |
| 注意 | 水解這一步驟在總?cè)ゼ鬃兡I上腺素和總間甲腎上腺素的檢測中是*的。而在游離去甲變腎上腺素和變腎上腺素的檢測中則無須水解。樣品被懷疑高于zui高標(biāo)準(zhǔn)的樣品必須在水解步驟前用0.1M HCL進(jìn)行稀釋。 |
9.2.1水解試管中樣品的準(zhǔn)備
1） 將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和尿液樣品各10μL加入到相應(yīng)的水解試管中
2） 在每一試管中加入40μL0.1M的HCl。
3） 蓋好試管，90°C下水解1h（用溫度計(jì)測溫度）。之后平衡至室溫，旋渦混合。
4） 在每一試管中加入100μL指示劑緩沖液，旋渦混合。
5） 在每一試管中加入20μL的酰化作用試劑，加入指示劑后立即震蕩，確保加入的?；噭┖驮嚬軆?nèi)物質(zhì)*混合。
6） 蓋好試管，室溫下溫育15min。
7） 在每一試管中加入1mL稀釋的檢測緩沖液。
10、實(shí)驗(yàn)步驟
1） 將?；瘶?biāo)準(zhǔn)品、?；|(zhì)控品和?；∪藰悠贩謩e50μL加入到相應(yīng)的微孔中。
2） 在每一微孔中加入50μL去甲變腎上腺素生物素。
3） 在每一微孔中加入50μL去甲變腎上腺素抗血清。
4） 蓋板，小心振蕩包被板。振蕩器（500rpm）上室溫溫育1h（500rpm）
5） 移去粘性金屬板。棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用250μL洗滌液洗板6次（洗板機(jī)洗）,（人工清洗則洗3次即可），吸水紙上拍干。
6） 在每一微孔中加入150μL臨時(shí)配制的酶聯(lián)物。
7） 蓋上一新的粘性金屬板。振蕩器（500rpm）上室溫（18-25℃）溫育30min。
8） 移去粘性金屬板。棄取孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用250μL洗滌液洗板6次（洗板機(jī)洗）,（人工清洗則洗3次即可），吸水紙上拍干。
9） 如果有條件的話，使用8孔微量移液器加底物液和終止液時(shí)。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用自動置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。
10） 在每一微孔中加入100μL臨時(shí)配制的PNPP底物液。
13） 加入終止液后60min之內(nèi)在405nm處測OD值（參考波長：60 0-650nm）
11、結(jié)果計(jì)算
：,26680196 郵政編碼：518067
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